如何正確地使用色譜柱

　　1、吸附柱色譜

　　吸附色譜的原理：在一定條件下，硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用，這種作用主要是物理和化學(xué)作用兩種.物理作用來自于硅膠表表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力.化學(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。

　　色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內(nèi)裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果。除另有規(guī)定外，通常多采用直徑為0.07～0.15mm的顆粒。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時的流速，均按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。

　　2、分配柱色譜

　　方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前，先將載體和固定液混合，然后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊；供試品可溶于固定液，混以少量載體，加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和，以避免洗脫過程中兩相分配的改變。

　　色譜柱的大小規(guī)格由待分離樣品的量和吸附難易程度來決定。一般柱管的直徑為0.5～l0 cm，長度為直徑的10～40倍。填充吸附劑的量約為樣品重量的20～50倍，柱體高度應(yīng)占柱管高度的3/4，柱子過于細(xì)長或過于粗短都不好。

　　裝柱前，柱子應(yīng)干凈、干燥，并垂直固定在鐵架臺上，將少量洗脫劑注入柱內(nèi)，取一小團(tuán)玻璃毛或脫脂棉用溶劑潤濕后塞入管中，用一長玻璃棒輕輕送到底部，適當(dāng)搗壓，趕出棉團(tuán)中的氣泡，但不能壓得太緊，以免阻礙溶劑暢流（如管子帶有篩板，則可省略該步操作）。再在上面加入一層約0.5 cm厚的潔凈細(xì)砂，從對稱方向輕輕叩擊柱管，使砂面平整。

　　常用的裝柱方法有干裝法和濕裝法兩種。

　　1、干裝法：在柱內(nèi)裝入2/3溶劑，在管口上放一漏斗，打開活塞，讓溶劑慢慢地滴入錐形瓶中，接著把干吸附劑經(jīng)漏斗以細(xì)流狀傾瀉到管柱內(nèi)，同時用套在玻璃棒（或鉛筆等）上的橡皮塞輕輕敲擊管柱，使吸附劑均勻地向下沉降到底部。

　　填充完畢后，用滴管吸取少量溶劑把粘附在管壁上的吸附劑顆粒沖入柱內(nèi)，繼續(xù)敲擊管子直到柱體不再下沉為止。柱面上再加蓋一薄層潔凈細(xì)砂，把柱面上液層高度降至0.1～l cm，再把收集的溶劑反復(fù)循環(huán)通過柱體幾次，便可得到沉降得較緊密的柱體。

　　2、濕裝法：基該方法與干裝法類似，所不同的是，裝柱前吸附劑需要預(yù)先用溶劑調(diào)成淤漿狀，在倒入淤漿時，應(yīng)盡可能連續(xù)均勻地一次完成。如果柱子較大，應(yīng)事先將吸附劑泡在一定量的溶劑中，并充分?jǐn)嚢韬筮^夜（排除氣泡），然后再裝。

　　無論是干裝法，還是濕裝法，裝好的色譜柱應(yīng)是充填均勻，松緊適宜一致，沒有氣泡和裂縫，否則會造成洗脫劑流動不規(guī)則而形成“溝流”，引起色譜帶變形，影響分離效果。